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硅膠色譜柱再生的方法是什么?

更新時(shí)間:2021-11-16      點(diǎn)擊次數(shù):1658
   1.硅膠色譜柱的平衡
    硅膠色譜柱由工廠測(cè)試后是保存在水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇沖洗硅膠色譜柱。請(qǐng)一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡硅膠色譜柱,您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得的"補(bǔ)償",而且您的硅膠色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)!操作步驟:
  a.平衡開始時(shí)將流速緩慢地提高,用流動(dòng)相平衡硅膠色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低,則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡)
  b.如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
  2.硅膠色譜柱的再生
  長(zhǎng)期使用的硅膠色譜柱,往往柱效會(huì)下降(柱子的理論塔板數(shù)減低)。可以對(duì)硅膠色譜柱進(jìn)行再生,在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。
  建議用來(lái)沖洗柱子的溶劑體積
  硅膠色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積
  125-4mm1.6ml30ml
  250-4mm3.2ml60ml
  250-10mm20ml400ml
  選擇再生方法:
  極性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色譜填料)的再生:
  正庚烷→→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
  非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:水→乙腈→(或異丙醇)→乙腈→水
  注意:
  a.在對(duì)NH2改性的硅膠色譜柱進(jìn)行再生時(shí),由于NH2可能以銨根離子的形式存在,因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液*流出稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的硅膠色譜柱,如果簡(jiǎn)單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
  3.硅膠色譜柱的維護(hù)
  a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度)
  b.大多數(shù)反相硅膠色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡量不超過(guò)該硅膠色譜柱的pH范圍
  c.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化
  d.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
  e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中
  f.氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性,故使用時(shí)要注意,柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑,以避免腐蝕